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Human IL-5 ELISA试剂盒
名称 Human IL-5 ELISA试剂盒
型号
报价 1
特点 IL-5试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-5单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品和检测样本,经过孵育,样本中存在的IL-5与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入生物素化的单克隆抗体,孵育。洗涤去除未结合的生物素抗体,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(S-HRP)。洗涤,加入显色底物TMB,避光显色。}
  • 详细内容

一.Human IL-5 ELISA试剂盒检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-5单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品和检测样本,经过孵育,样本中存在的IL-5与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入生物素化的单克隆抗体,孵育。洗涤去除未结合的生物素抗体,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(S-HRP)。洗涤,加入显色底物TMB,避光显色。终止液终止反应,在450 nm波长(参考波长570-630 nm)测定吸光度值。颜色反应的深浅与样本中IL-1α的浓度成正比。

 

二.Human IL-5 ELISA试剂盒样本采集与贮存
细胞培养上清 沉淀之后即刻检测, 或者分装,-20℃贮存。避免反复冻融。

血清样本 分离管分离血清。在1000 g离心之前,使血样凝集30分钟。吸取血清样本之后即刻检测,或者分装,-20℃贮存。避免反复冻融。

血浆样本 EDTA,枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。在血样收集 30分钟内离心收集样本。即刻检测,或者分装,-20℃贮存。避免反复冻融。 本试剂盒可能适用于其它生物学样本。

注意:检测前,样本中可见的沉淀必须去除。不要使用严重溶血或高血脂的样本。 样本应该被分装并贮存于-20℃,以避免人IL-5活性的丢失。如果在24小时内检测,样本可以存放在2-8℃。 避免样本的反复冻融。在分析前,冷冻样本应该缓慢的恢复至室温,轻柔地混匀。

三.检测步骤:

1. 准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。 2. 将不需要的板条拆卸下来,放回装有干燥剂的铝箔袋,重新封好封口。 3. 300 μl洗液洗板两次,加入300 μl洗液静置浸泡15分钟。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后,在吸水纸上将微孔板拍干。洗板完成之后,请立即使用微孔板,不要让微孔板干燥。 4. 每孔加入50 μl检测缓冲液。 5. 加入50 μl的标准品,样本和对照品。保证连续加样,请不要间断。加样过程在15分钟内完成。 6. 每孔加入50 μl检测抗体。 7. 使用封板膜封板。100转/分钟振荡,室温孵育2小时。8. 弃掉液体,每孔加入300 μl洗液洗板,洗涤6次。每次洗板,在吸水纸上拍干。为获得理想的实验性能,必须彻底移除残留液体。 9. 每孔加入100 μl辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。 10. 使用新的封板膜封板。100转/分钟振荡,室温孵育45分钟。 11. 重复步骤8。 12. 每孔加入100 μl显色底物TMB,避光,室温孵育10-30分钟。 13. 每孔加入100 μl终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀,请轻轻叩击板框,充分混匀。 14. 在30分钟之内,酶标仪450 nm波长测定OD值。如果能够进行双波长检测,参考波长设定为570 nm或者630 nm。如果不能双波长检测,请用450 nm的测定值减去570 nm或630 nm的测定值。仅使用450 nm测定会导致OD值偏高,并且准确度降低。

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