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细胞因子试剂盒在检测前需要做哪些准备工作

2018-10-18 浏览次数:103

     细胞因子试剂盒采用双抗体夹心ELISA法,用抗肝细胞生长因子(HGF)抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人肝细胞生长因子(HGF)与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗肝细胞生长因子(HGF)抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗肝细胞生长因子(HGF)抗体与结合在包被抗体上的人肝细胞生长因子(HGF)结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,肝细胞生长因子(HGF)浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中细胞生长因子(HGF)的浓度。
    细胞因子试剂盒检测前准备工作:
     1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
     2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。
     3. 标准品: 于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。 
     4. 生物素化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
     5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

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