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人胰岛素检测试剂盒样品收集

2018-05-28 浏览次数:173

     人胰岛素检测试剂盒采用双抗体夹心法:抗人胰岛素(INS)单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的胰岛素(INS)会与单抗结合,游离的成份被洗去。加入酶标抗体,抗人胰岛素(INS)抗体与结合在单抗上的人胰岛素(INS)结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物,若反应孔中有胰岛素(INS),辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450nm处测OD值,胰岛素(INS)浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中的胰岛素(INS)浓度。
 
    人胰岛素检测试剂盒样品收集:
     1. 血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
     2. 血浆:抗凝剂推荐使用EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂样品。
     3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会
影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
     4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
     5. 其它生物样品:1000×g离心20分钟,取上清即可检测
     6. 样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。
     7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融。
     8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品zui高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。
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